Prueba de esterilidad I

Medios de cultivo y soluciones

La prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras que se encuentran como contaminantes en productos estériles.

Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad

Para evitar una contaminación accidental la prueba debe llevarse a cabo en condiciones asépticas por lo que periódicamente se realizará el control ambiental de las áreas de trabajo, así como del equipo y material empleados. Los envases de las muestras deben desinfectarse previamente a su análisis. A los  productos envasados al vació, se les debe introducir aire filtrado a través de algodón estéril. Si el producto tiene diluyente o algún aplicador anexo, también debe cumplir la prueba de esterilidad. Se debe llevar a cabo una prueba en blanco como testigo, paralela a los análisis de las muestras.

Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones

Prepararlos medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o preparados en base a sus formulaciones. Ajustar el pH con soluciones 1N de hidróxido de sodio ó 1N de ácido clorhídrico para que después de esterilizar en autoclave se obtenga el valor indicado en cada caso. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Medio A. Medio fluido de cioglicolato

Mezclar los ingredientes hasta que estén completamente disueltos en agua, calentar si es necesario. Ajustar el pH, calentar nuevamente sin hervir y filtrar a través de papel filtro humedecido. Añadir la solución de resarsurina de sodio y envasar en tubos adecuados. Esterilizar. El medio presenta coloración rosa superficial por la oxidación del mismo, la cual no debe rebasar la tercera parte del volumen total; si la coloración es mayor, se puede calentar una vez en baño de agua hasta que la coloración desaparezca. Usarse cuando la coloración se reestablezca a la décima parte del volumen total del medio.

Medio B. Medio fluido de tioglicolato con  polisorbato 80

Preparar el medio como lo realiza para el medio A adicionar por cada litro de medio 50mL de polisorbato 80. Esterilizar.

Medio C. Medio Fluido de tioglicolato con penicilanasa

Preparar el medio como se indica en el medio A. A cada tubo de medio estéril  adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presenten la muestra.

Medio D. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa

Preparar el medio como indica medio B. A cada tubo con medio estéril, adicionar suficiente penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Medio E. Caldo soya tripticaseína

Disolver los ingredientes en 500mL de agua, calentando suavemente hasta que la disolución sea completa  y llevar ala aforo a 1000mL. Ajustar el pH, filtrar y envasar en tubos adecuados. Esterilizar.

Medio F. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80

Preparar el medio como se indica en el medio E. Adicionar 5 ml de polisorbato 80 por cada litro de medio.

Medio G. Caldo soya tripticaseína con penicilinasa

Preparar el medio como se indica en Medio E. Adicionar la cantidad suficiente de penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio H. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa.
Preparar el medio como se indica en medio F. A cada tubo con medio estéril adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Solución I. Solución al 1% de peptona

Disolver un gramo de digerido péptico de tejido animal en 1000mL de agua destilada, filtrar y ajustar el pH a 7.1±0.2, Distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución II. Solución al 1% de peptona con polisorbato 80

Preparar la solución como se indica en I. Agregar 1mL de polisorbato 80 por cada litro de solución. Envasar y esterilizar.

Solución III. Solución al 0.85% de cloruro de sodio

Disolver 8.5g de cloruro de sodio en agua destilada y llevar al aforo a 1000mL; distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución IV. Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80

Disolver los ingredientes en agua destilada, llevar al aforo a 1000mL, ajustar el pH, envasar y esterilizar.

Solución V. Solución de penicilinasa

Preparar la solución de penicilinasa y valorarla en unidades Levy. Esterilizar la solución de penicilinasa por filtración a través de membrana.

Solución VI. Meristato de isopropilo

Utilizar meristato de isopropilo esterilizado por filtración a través de membrana con pH del extracto acuoso de 5.5 o mayor. Determinar el pH del extracto acuoso y envasar en frascos estériles.

Como se puede observar es crítico que los medios estén estériles, lo que se hace mediante esterilización por calor húmedo en la mayoría de los casos, razón por la cual la autoclave debe estar funcionando correctamente, en ICLAB contamos con personal calificado y apto para realizar pruebas de calibración, ajuste y validación de esterilización por éste método.

Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB) es una empresa dedicada a la calibración de instrumentos de medición tales como: espectrofotómetros, potenciómetros,  viscosímetros, balanzas, básculas, manómetros, entre otros.

El personal de ICLAB está ampliamente capacitado para dar un servicio y asesoría a la mayoría de los instrumentos existentes en el mercado.

Conozca el Perfil, Productos, Dirección y Teléfono de ICLAB.

O bien, haga contacto directo con ICLAB para solicitar mayor información sobre sus pruebas de calibración, ajuste y validación de esterilización.

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Generalidades sobre los aditivos alimenticios

¿Qué son los aditivos alimenticios?

Se entiende por aditivos alimenticios a todas aquellas sustancias que se agregan a alimentos y bebidas, con el objetivo de proporcionar o intensificar su aroma, color, sabor, sin modificar su aspecto físico.

Los aditivos alimenticios han sido usados desde hace tiempo, debido a la fuerte necesidad de conservar los alimentos eh buenas condiciones. Se cree que los primeros aditivos usados fueron la sal, para la conservación de la carne y pescado y el azúcar, para la conservación de las frutas.

El uso de los aditivos alimenticios ha ido creciendo debido al incremento en la producción de alimentos preparados, procesados, seguros, nutritivos y sabrosos durante todo el año, a través de un creciente mercado globalizado.

Los aditivos alimenticios desempeñan una gran variedad de funciones útiles, por ejemplo: el consumidor final, generalmente no vive cerca de las zonas de producción, por lo que el uso de los aditivos ayuda a mantener los alimentos en buen estado físico y microbiológico, mientras son transportados.

Etanol Bosques es una empresa dedicada a la distribución y venta de alcohol etílico y/o etanol desnaturalizado, grado alimenticio, además de algunos aditivos alimenticios, como son:

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¿Qué es la electroforesis?

La electroforesis es la migración de proteínas, moléculas u otras partículas cargadas eléctricamente, disueltas o suspendidas en un electrolito a través del cual se pasa una corriente eléctrica.

Precauciones en la electroforesis

Los voltajes utilizados en electroforesis pueden proporcionar descargas eléctricas letales. El peligro se incrementa por el uso de soluciones acuosas reguladoras y la posibilidad de trabajar en ambientes húmedos.

A excepción de la fuente de poder, el equipo debe estar dentro de una caja metálica o en una caja de material aislante. La caja debe tener un aditamento que permita apagar la fuente de poder en caso de ser abierta.

Los cables de alto voltaje que unen la fuente de poder y el aparato deben ser de metal trenzado y protegido. Cubierto completamente la parte central aislada del conductor el cual debe estar aterrizado.

La base del aparato debe estar conectada a tierra de tal forma que cualquier escape de la solución electrolitos produzca un corto que desactive la fuente de energía.

Debido a los peligros potenciales asociados a la electroforesis, el personal del laboratorio que maneje esta técnica debe estar completamente familiarizado con el equipo y el proceso antes de aplicarlo.

Equipos para electroforesis

El aparato para electroforesis consiste de:

Fuente de poder adecuada que administre una corriente constante directa y aditamentos para indicar y controlar tanto el voltaje de suministro como el consumo de corriente, se puede adicionar un circuito que estabilice la salida de corriente (regulador de voltaje).

Ensamble electroforético con aditamentos especiales para soportar las placas electroforéticas. Para las electroforesis donde se utilice papel, gel de agar, gel de agarosa-almidón o acetato de celulosa como soporte electroforético, el ensamble consiste en un tanque con tapa de vidrio o de algún otro material que permita el cerrado hermético. El tanque contiene aditamentos de seguridad los cuales desconectan la fuente de energía cuando la tapa se quita, además dos dobles canales en cada extremo provistos de una parte divisoria central.

A lo largo del fondo de los compartimentos de cada doble canal se encuentra un electrodo de platino conectado por medio de cables aislados y sellados a las paredes del tanque, al cable externo conectado a la fuente de poder.

Los canales se llenan con la suficiente cantidad del  electrolito especificado en la monografía, para asegurar la inmersión completa de los electrodos.

El contacto entre el compartimiento interno y el externo de cada doble canal puede ser por medio de un puente  de papel electroforético o bien mediante pequeñas perforaciones de la parte central divisoria.

Para electroforesis en gel de agar y en gel de agarosa-almidón el tanque está diseñado para permitir cierta ventilación y evitar la condensación de la humedad o que la capa del medio sólido se seque.

Para electroforesis en gel de poliacrilamida el ensamble consiste en dos recipientes de polimetilmetacrilato para la solución reguladora, conteniendo cada uno un electrodo de platino. El recipiente superior está montado arriba verticalmente del inferior y su altura es ajustable. En su base, tiene una serie de soportes de hule equidistantes del electrodo.

Soporte electroforético

Para electroforesis en papel y en acetato de celulosa, el soporte electroforético es en forma de tiras sostenidas entre los canales sobre una superficie uniforme compuesta de puntos de contacto de plástico inerte o vidrio, espaciados para minimizar la difusión capilar de la solución de electrolitos.

Para electroforesis en gel de agar y de agarosa-almidón, el soporte electroforético es en forma de capa de gel de 6mm de grosor sobre una placa de vidrio la cual, se coloca sobre una placa cóncava metálica a través de la cual puede ser circulado un líquido congelante y la superficie superior de la cual esta sujeta para permitir un contacto íntimo con la placa de vidrio.

El soporte electroforético se conecta tanto directamente como indirectamente por medio de mechas de un material adecuado, al compartimiento de cada doble canal donde no contiene el electrodo.

Para electroforesis en gel de poliacrilamida, el soporte electroforético es en forma de gel contenido en tubos de vidrio limpios de 7.5 cm de longitud y 0.5cm de diámetro interno.

Dado que en la electroforesis es crucial el buen funcionamiento de la cámara electroforética, tanto para prevención de accidentes como para la separación adecuada de los analitos, es importante que la cámara sea verificada al menos dos veces al año, ICLAB cuenta con ingenieros de servicio capacitados para tal efecto.

Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB) es una empresa dedicada a la calibración de instrumentos de medición tales como: espectrofotómetros, potenciómetros,  viscosímetros, balanzas, básculas, manómetros, entre otros.

El personal de ICLAB está ampliamente capacitado para dar un servicio y asesoría a la mayoría de los instrumentos existentes en el mercado.

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